您當前所在的位置:首頁 > 新聞中心 > 公司新聞
雞大腸桿菌多價滅活苗的研制及應用
【發布日期:2006-11-19】  【文章來源:lonsun.cn】  【閱讀次數: 次】  【字體:  
摘 要: 用分離的雞大腸桿菌地方致病菌株與大腸桿菌標準菌株制備細菌懸液,細菌含量大于1.8×1010個/mL,用4 mL/L濃度的甲醛溶液作用12 h,滅活后加入佐劑,制備雞大腸桿菌多價滅活苗,免疫接種10日齡健康雛雞,15 d后進行攻毒試驗。結果表明,雞大腸桿菌多價滅活苗的保護率可達98%。田間應用,雞群產蛋期月死淘率由1.5%~3%下降到0.5%~0.8%。
  
  關鍵詞: 雞大腸桿菌;多價滅活苗;免疫保護
  
  雞大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌(Escherichia coli)所引起的一種雞的傳染病。主要表現為敗血癥、心包炎、肝周炎、氣囊炎、輸卵管炎、腹膜炎、大腸桿菌肉芽腫和全眼球炎等。目前對本病的防治,一方面采用化學藥物控制,另一方面采用疫苗接種的方法。由于化學藥物的長期使用,產生了許多耐藥性菌株,對動物和人類的健康都造成了嚴重的危害。因此,疫苗在本病防治中的作用顯得尤為重要。為了防止本病的發生,筆者從當地不同雞群中分離篩選出3株強致病菌株,與標準菌株一起研制出雞大腸桿菌多價油乳劑滅活苗,用于雞群的預防,收到滿意的效果,現介紹如下。
  
 
 1 材料與方法
  
  1.1 材料
  
  雞大腸桿菌標準菌株,O1、O2、O35、O78和抗“O”血清,由中國獸藥監察所提供。試驗雞,不同日齡健康雞,由銅川某雞場提供。試劑,司班-80、吐溫-80,西安化學試劑廠;硬脂酸鋁,上海中國遠航化工廠;甲醛,分析純,西安化學試劑廠;10號白油,杭州煉油廠。
  
  1.2 方法
  
  1.2.1 雞致病性大腸桿菌的分離鑒定 無菌操作采集病料,接種于營養肉湯,經37 ℃ 24 h培養,將肉湯培養物轉接到麥康凱瓊脂平板劃線培養,37 ℃ 24 h后挑取典型菌落接種三糖鐵培養基及其它生化反應培養基。并對分離的3株菌用大腸桿菌抗“O”標準血清進行分型鑒定。
  
  1.2.2 致病力試驗 用分離菌的24 h肉湯培養物0.1 mL(含菌量約1.8×108 cfu)皮下接種30日齡健康小雞4只,正常飼喂,觀察發病及死亡情況。
  
  1.2.3 菌苗制備 分別將地方分離株與標準菌株接種于營養肉湯,置37 ℃溫箱24 h進行種子培養,觀察有無雜菌污染,然后接種于營養瓊脂平板進行大量培養,用生理鹽水洗下菌苔按一定比例混合,制備1.8×1010cfu/mL濃度的細菌懸液,再經反復凍融震蕩,使菌體菌毛脫落,并使部分菌體裂解,充分暴露其抗原成分。最后向菌液加入終濃度為0.4 mL/L的甲醛,無菌檢驗后參照“獸醫生物藥品制造規程”制成油佐劑滅活苗。
  
  1.2.4 菌苗的檢驗
  
 。1)物理性狀。菌苗的物理性狀為乳白色、均勻一致,將其滴于冷水中,漂浮于水面,有向外擴散的趨勢,久置不分離。
  
 。2)安全試驗。取23日齡和18周齡健康雞各10只,每只皮下注射菌苗2.5 mL(5倍免疫劑量)觀察10 d。
  
 。3)免疫保護試驗。按照菌苗中所含血清型種類,取10日齡健康雛雞50只,分5組,每種血清型10只,分別每只雞皮下注射菌苗0.5 mL,免疫接種后21 d,分別以相應的血清型大腸桿菌肉湯培養物攻毒,每只注射菌液0.2 mL(含菌量約3.6×108 cfu)
  
 
 2 結果
  
  2.1 大腸桿菌的分離鑒定
  
  分離菌接種麥康凱培養基37 ℃ 24 h后,呈現邊緣整齊或波狀、稍突起,表面光滑濕潤,直徑1 mm~2 mm、粉紅色或深紅色的圓形菌落,在伊紅美藍瓊脂上呈紫黑色帶金屬光澤的圓形菌落,在普通瓊脂平板上呈灰白色,直徑1.5 mm~2 mm的圓形菌 FL) 落;細菌涂片染色檢查為革蘭氏陰性、大小一致的桿菌。
  
  3株地方分離株分別接種到三糖鐵培養基上,經37 ℃ 72 h培養,產酸、產氣,不產生硫化氫。生化特征為:分解葡萄糖、乳糖、甘露醇,產酸產氣;分解阿拉伯糖;吲哚試驗、甲基紅試驗呈陽性反應;尿素酶、明膠液化、檸檬酸鹽利用試驗,VP試驗等呈陰性反應。
  
  對分離的3株地方菌株分別用中國獸藥監察所提供的大腸桿菌“O”抗原定型血清進行分型。其中2株血清型分別是O2、O35,另1株未能分型。
  
  2.2 菌株的致病力試驗
  
  分離菌株的24 h肉湯培養物攻毒后24 h~48 h,接種雞發病并死亡,死亡率為100%。
  
  2.3 疫苗的安全性試驗 
  
  用自制滅活苗分別免疫24日齡和18周齡雞各10只,每只雞皮下注射2.5 mL,除有一過性精神沉郁外,沒有發病和死亡。
  
  2.4 疫苗的免疫保護試驗
  
  免疫組攻毒后沒有異常表現,健康存活;對照組于攻毒后24 h~36 h發病,并陸續死亡。
  
  2.5 田間試驗
  
  在銅川市及周邊地區,對蛋雞于12周齡,18周齡各皮下注射0.5 mL,先后免疫接種2.5萬只蛋雞,雞群產蛋期月死淘率由1.5%~3%下降到0.5%~0.8%,收到明顯的效果。
  
 
 3 討論
  
  3.1 用地方分離的雞大腸桿菌強致病菌株與標準菌株制備的多價油乳劑滅活苗,預防雞大腸桿菌病安全可靠,可減少藥費開支,防止耐藥菌株的產生。
  
  3.2 用地方分離株加標準菌株制備的多價苗,免疫保護力強。單用地方分離株做疫苗,雖然適合當地的血清型,但交叉保護率較低。世界許多國家的調查發現,雞致病性大腸桿菌的最常見血清型是O1、O2、O35和O78,有些菌株不能分型,用地方分離菌株與標準菌株制備的多價苗,交叉保護率高,效果穩定可靠。另外,大腸桿菌懸液經反復凍融震蕩后,可使菌體的菌毛脫落,部分菌體裂解,充分暴露其抗原成分,增強免疫效果。
  
  3.3 有的雞大腸桿菌油乳劑滅活苗注射后,雞只反應大,出現精神不好,減食等應激反應。但筆者制備的多價苗經安全試驗和田間應用后觀察,注苗的雞飲食正常,筆者認為注苗后出現較大的反應,主要原因是大腸桿菌在培養過程中產生的毒素引起的。所以,菌懸液制備后應盡早滅活,防止其毒素的產生,是減少菌苗不良反應的關鍵。

Copyright © Luan Huarun Science Aquaculture Co.,LTD All Right Reserved
版權所有:六安市華潤科技養殖有限公司  皖ICP備06014405號  技術支持:龍訊科技
暴力强奷女同学完整版电影